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La PCR es una prueba que se ha utilizado en el diagnóstico de muchas enfermedades. El método de PCR permite mostrar la presencia directa de bacterias en el organismo, y específicamente su ADN. Se utilizan pruebas de PCR, entre otras en el diagnóstico de la enfermedad de Lyme. ¿Qué es la técnica de PCR? ¿Qué es la PCR en tiempo real?
Tabla de contenido:
- PCR (prueba): ¿que es la técnica de PCR?
- PCR (investigación): aplicación del método PCR
- PCR (investigación) - enfermedad de Lyme
- PCR (investigación) - resultados. ¿Pueden ser falsos positivos?
- PCR (investigación) - resultados. ¿Pueden ser falsos negativos?
La PCR (reacción en cadena de la polimerasa) es el método básico utilizado en los laboratorios genéticos y moleculares. Fue desarrollado en 1983 por Kara Mullis, quien recibió el Premio Nobel en 1993 por ello.
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PCR (prueba): ¿que es la técnica de PCR?
La prueba de PCR consiste en la amplificación múltiple (generalmente en 30-40 ciclos) de un fragmento específico de ADN, por ejemplo, genes que codifican proteínas de Borrelia, con el uso de la enzima polimerasa.
Luego, se utilizan tintes moleculares especiales para hacer visible el fragmento de ADN amplificado. La PCR, debido a la amplificación de fragmentos de ADN específicos, es un método ultrasensible.
En el método de PCR, los fragmentos de ADN se amplifican utilizando pares de cebadores específicos para una región determinada del ADN bacteriano. Por ejemplo, las regiones diana en la PCR utilizadas en el diagnóstico de la enfermedad de Lyme son genes que codifican proteínas, p. Ej. ADNr 16S, recA, fla, p66, OspA.
El material biológico a partir del cual se puede realizar la prueba es:
- sangre
- una sección de piel de un eritema migratorio
- fluido cerebroespinal
- líquido sinovial o del cartílago articular
- orina
PCR (investigación): aplicación del método PCR
Además del diagnóstico de borreliosis de Lyme mediante el método de PCR, es posible detectar fragmentos de ADN específicos de otros microorganismos o humanos. Por tanto, el método de PCR también se utiliza en:
- diagnóstico y seguimiento de infecciones virales: virus del herpes (virus del herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovirus), VIH, virus de la hepatitis (VHB y VHC)
- Diagnóstico y seguimiento de infecciones bacterianas, especialmente aquellas bacterias que no pueden identificarse mediante cultivos, por ejemplo, tuberculosis.
- diagnóstico y seguimiento de enfermedades neoplásicas: leucemia, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de pulmón
- diagnóstico de predisposición al cáncer: cáncer de mama y de ovario (genes BRCA1 y BRCA2), cáncer colorrectal (genes APC y CHEK2)
- diagnóstico de enfermedades genéticas: hemocromatosis (gen HFE), talasemia (genes HBA1 y HBA2), enfermedad celíaca (genes HLA)
- pruebas de paternidad, que detectan la compatibilidad del ADN del niño y el padre
Actualmente, existen muchas modificaciones al método de PCR. Por ejemplo, en el diagnóstico de la enfermedad de Lyme, se utilizan principalmente los métodos de PCR anidada y PCR en tiempo real. Este último es un método cuantitativo y permite la determinación del número exacto de copias de ADN de Borrelia en el material biológico probado.
PCR (investigación) y enfermedad de Lyme
Las pruebas serológicas son la base para el diagnóstico de la enfermedad de Lyme. Sin embargo, existen situaciones clínicas que pueden hacer que estas pruebas sean falsas negativas:
- ventana serológica, es decir, el período inicial de infección en el que el cuerpo aún no produce anticuerpos IgM e IgG específicos contra las espiroquetas de Borrelia
- en personas con inmunodeficiencia que no producen suficientes anticuerpos
- la presencia de inmunocomplejos que consisten en antígenos de Borrelia spirochetes y anticuerpos específicos para ellos y previenen la detección de anticuerpos por métodos serológicos
Si se sospechan los síntomas de la enfermedad de Lyme en el paciente y los resultados de la prueba serológica son negativos, se pueden realizar pruebas moleculares basadas en el método de PCR.
El ADN de las espiroquetas de Borrelia se puede detectar en la etapa temprana de la infección, ya que el número de espiroquetas en los fluidos corporales es entonces el más alto.
En el diagnóstico de borreliosis de Lyme, se utilizan principalmente métodos serológicos como ELISA, pero en algunas situaciones clínicas son útiles las pruebas genéticas que utilizan el método de PCR.
Cuanto más tiempo transcurra desde la infección, es menos probable que se detecte ADN bacteriano. Por lo tanto, en algunos casos, antes de realizar la prueba de PCR, las bacterias se cultivan en un medio especial durante 1-2 semanas y luego se realiza la prueba.
Este enfoque se utiliza en caso de sospecha de enfermedad de Lyme y líquido cefalorraquídeo extraído. En la fase tardía de la infección, es más apropiado realizar una prueba ELISA.
El método de PCR no debe utilizarse en el diagnóstico de rutina de la borreliosis de Lyme debido a la falta de estandarización con respecto a la presencia de variedades de Borrelia burgdorferi en Polonia.
Sin embargo, en el caso de dificultades en el diagnóstico (especialmente en la etapa temprana de la enfermedad), el resultado de la prueba de PCR ayuda en el proceso de diagnóstico.
Un resultado positivo de la prueba significa que se detectó la presencia de ADN de Borrelia burgdorferi y sus variedades en el material analizado, pero no explica si se está produciendo una infección activa en el cuerpo. Por otro lado, un resultado negativo no excluye la presencia de bacterias en el cuerpo.
Algunos laboratorios ofrecen pruebas para detectar la presencia de ADN de Borrelia en la garrapata. Sin embargo, el resultado de tal examen no es la base para el diagnóstico de la enfermedad de Lyme en una persona mordida.
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Prueba ELISA: ¿qué detecta? ¿Cómo leer los resultados? Precio de la pruebaPCR - resultados. ¿Pueden ser falsos positivos?
La PCR es un método ultrasensible y, al mismo tiempo, muy sensible a la contaminación. Por tanto, en las pruebas basadas en PCR es muy importante seleccionar un control interno adecuado para descartar falsos positivos.
La clave también es la colección correcta de material para la prueba, así como la experiencia y confiabilidad del diagnosticador que realiza la prueba.
PCR - resultados. ¿Pueden ser falsos negativos?
Como en cualquier prueba de laboratorio, también en el método de PCR pueden aparecer resultados falsos negativos. Aquí es crucial recolectar sangre para un anticoagulante apropiado, porque algunos de ellos, como la heparina, pueden inhibir la reacción de PCR.
Además, la recolección de material después del inicio de la terapia con antibióticos puede causar una disminución en la eficiencia de la reacción de PCR y una mayor probabilidad de resultados falsos negativos.
También hay que tener en cuenta que las bacterias Borrelia viven muy poco tiempo en la sangre y los fluidos corporales, porque gracias a unos receptores especiales penetran muy rápidamente en lugares del cuerpo "de difícil acceso".
Por lo tanto, en contraste con el diagnóstico de otros microorganismos, el número de espiroquetas de Borrelia en el material biológico es pequeño, a veces incluso en el límite de detección del método de PCR. Esto también puede causar un falso negativo.
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Prueba de transformación de linfocitos (LTT)Literatura
- Dunaj J. et al ... La importancia del método de PCR en el diagnóstico de la borreliosis de Lyme. Vistazo Epidemiol. 2013, 67, 119 - 123.
- Diagnóstico de laboratorio de enfermedades transmitidas por garrapatas. Recomendaciones del grupo de trabajo: Cámara Nacional de Diagnósticos de Laboratorio, Instituto Nacional de Salud Pública-Instituto Nacional de Higiene, Consultor Nacional en el campo de enfermedades infecciosas, Departamento de Enfermedades Infecciosas y Neuroinfecciones, Universidad Médica de Białystok, Sociedad Virológica Polaca, Varsovia 2014.
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