La prueba ELISA detecta numerosas enfermedades, por lo que ha encontrado una amplia aplicación en la medicina y más. Sin embargo, la prueba ELISA es más conocida por su diagnóstico de enfermedad de Lyme. ¿Qué es la prueba ELISA? ¿Cómo interpretar los resultados? Cual es el precio de la prueba?
Tabla de contenido:
- Prueba ELISA: ¿qué detecta? Aplicación de la prueba ELISA
- Prueba ELISA: ¿qué es la prueba?
- Prueba ELISA y enfermedad de Lyme: ¿cuándo realizarla?
- Prueba ELISA - precio. ¿Cuánto cuesta una prueba ELISA?
- Prueba ELISA - resultados. ¿Pueden ser falsos positivos?
- Prueba ELISA - resultados. ¿Pueden ser falsos negativos?
La prueba ELISA, es decir, el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas, es un método de laboratorio comúnmente utilizado que sirve, entre otros, para la detección cuantitativa de anticuerpos en sangre.
Por esta razón, la prueba ELISA ha encontrado aplicación en el diagnóstico de enfermedades bacterianas, como la borreliosis de Lyme.
La ventaja del método ELISA es su simplicidad y la posibilidad de una implementación rápida, así como una alta sensibilidad. El método ELISA se realiza utilizando placas de plástico especiales con pocillos llenos, por ejemplo, de proteínas de Borrelia (antígenos) y anticuerpos monoclonales específicos, que están diseñados para detectar anticuerpos en la muestra del paciente.
Prueba ELISA: ¿qué detecta? Aplicación de la prueba ELISA
La alta sensibilidad y simplicidad del método ELISA lo hizo aplicable en el diagnóstico de muchas enfermedades, pero es más conocido como el método de diagnóstico de la enfermedad de Lyme.
En el caso del diagnóstico de borreliosis de Lyme, el llamado ELISA indirecto, que permite detectar IgM o IgG específicas en el material ensayado. De la misma forma, se pueden detectar anticuerpos para el diagnóstico:
- infecciones virales: virus del herpes (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovirus), VIH, virus de la hepatitis (VHB y VHC)
- infecciones por protozoos: toxoplasmosis, giardiasis
- enfermedades autoinmunes: enfermedad celíaca (anticuerpos anti-tTG o anti-DPG), enfermedad de Hashimoto (anticuerpos anti-TG y anti-TPO), enfermedades inflamatorias del intestino (anticuerpos anti-ASCA y anti-ANCA)
- enfermedades parasitarias y alergias en las que se detectan anticuerpos IgE específicos. Su nivel aumentado puede indicar la presencia de alergias, por ejemplo, al polen y los alimentos, o una infestación parasitaria (tenia armada, lombriz intestinal humana)
También existen modificaciones en el método ELISA (el llamado ELISA sándwich), que permiten la detección de una muestra de proteínas distintas de los anticuerpos. Entonces el objetivo de la prueba es detectar en el material biológico:
- fragmentos de virus o bacterias, la mayoría de las veces son antígenos característicos de un patógeno determinado
- hormonas séricas, por ejemplo, estrógeno, prolactina, TSH, fT4, cortisol
- enzimas, por ejemplo, calprotectina, elastasa pancreática, fosfatasa alcalina
- marcadores tumorales, por ejemplo, CA-125
- la presencia de drogas en el suero
Este método también es aplicable en la industria alimentaria, donde puede detectar rastros de alérgenos (por ejemplo, leche, cacahuetes), OGM o toxinas en los alimentos.
Prueba ELISA: ¿de qué se trata?
El diagnóstico de, por ejemplo, la enfermedad de Lyme mediante el método ELISA consiste en detectar proteínas inmunes en el material biológico, anticuerpos que surgen durante la respuesta contra los antígenos de Borrelia.
Los anticuerpos se prueban en dos clases, IgM e IgG. Los IgM son los primeros anticuerpos que aparecen en el cuerpo cuando entran en contacto con bacterias y disminuyen con el tiempo.
Su lugar lo ocupan los anticuerpos IgG más persistentes que pueden permanecer en el cuerpo durante varias docenas de años.
De esta manera, la presencia de bacterias en el cuerpo se prueba indirectamente mediante la detección de anticuerpos dirigidos específicamente contra las espiroquetas de Borrelia.
Los anticuerpos en diversas etapas de la infección pueden dirigirse contra una variedad de proteínas de Borrelia. Por ejemplo, en una etapa temprana es la proteína p41.
En las últimas etapas comienzan a aparecer cada vez más proteínas, como p21, p30, p39, p43. Esta es la razón por la que el diagnóstico de la enfermedad de Lyme es extremadamente difícil.
La selección de proteínas bacterianas es extremadamente importante para que la prueba tenga un alto valor diagnóstico. Por lo tanto, de forma rutinaria en el diagnóstico de la enfermedad de Lyme, deben usarse pruebas ELISA de II o III generación en las que se seleccionan conjuntos de proteínas para obtener el resultado más fiable.
Prueba ELISA y enfermedad de Lyme. Cuando hacer
La borreliosis de Lyme es una enfermedad bacteriana causada por la bacteria Borrelia burgdorferi y sus muchas variedades.
El diagnóstico de la enfermedad no es sencillo debido a la complejidad de la respuesta inmune contra Borrelia y las imperfecciones de los métodos de laboratorio.
El método de laboratorio más utilizado es el método ELISA de alta sensibilidad, que detecta anticuerpos específicos producidos contra proteínas bacterianas.
En el diagnóstico de la enfermedad de Lyme se utiliza el método ELISA indirecto en el que se distinguen las siguientes etapas:
- incubación de los pocillos en la placa con material recogido del paciente, por ejemplo, suero. Si hay anticuerpos contra Borrelia en el material analizado, se unen a las proteínas en la parte inferior del pozo de reacción.
- Luego, el exceso de suero se enjuaga con un líquido de lavado especial (tampón) y el llamado conjugado, que es un anticuerpo ligado a enzima que se une a anticuerpos previamente ligados en los pocillos de reacción
- luego se agrega el sustrato para el conjugado y se produce una reacción de color (resultado positivo) o ninguna reacción de color (resultado negativo)
- el último paso es la lectura por parte del lector (espectrofotómetro) de la concentración de anticuerpos contra Borrelia en el suero del paciente
La prueba ELISA para la enfermedad de Lyme se realiza a partir de sangre y, en el caso de síntomas neurológicos (neuroborreliosis), también del líquido cefalorraquídeo.
El líquido sinovial no debe analizarse ya que existe una alta probabilidad de resultados falsos positivos.
La base para el diagnóstico de la enfermedad son los síntomas clínicos que lo indican, confirmados por los resultados de las pruebas de laboratorio.
La adición de un resultado de una prueba de laboratorio sin síntomas no autoriza el diagnóstico de la enfermedad de Lyme, ya que se ha demostrado que los anticuerpos contra Borrelia también se detectan en personas sanas.
El diagnóstico serológico de la borreliosis de Lyme comienza con una prueba ELISA de detección semicuantitativa. Si el resultado es negativo, significa que no se han detectado espiroquetas de Borrelia o el resultado es un falso negativo.
Si el resultado es positivo o débilmente positivo (equívoco), se debe realizar una prueba de Western blot de confirmación, que se caracteriza por una alta especificidad.
Esto es para confirmar que los resultados de ELISA son "verdaderos". Durante el diagnóstico, no puede omitir ninguno de los pasos anteriores y, por ejemplo, realizar un diagnóstico utilizando el método de Western blot inmediatamente o hacer un diagnóstico basado únicamente en un resultado positivo de ELISA.
En Polonia, el diagnóstico de la enfermedad de Lyme a menudo termina en la primera etapa de detección, lo que provoca una mala interpretación de los resultados positivos o débilmente positivos.
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La prueba cuesta alrededor de 60 PLN y se realiza de inmediato. Sin embargo, puede esperar unos tres meses por los resultados de la remisión.
Prueba ELISA - resultados. ¿Pueden ser falsos positivos?
Los resultados falsos positivos son el resultado de la reactividad cruzada de los anticuerpos IgM con otras proteínas. Los anticuerpos producidos por el cuerpo pueden reconocer "incorrectamente" un antígeno de otros microorganismos como el antígeno de Borrelia.
Los "errores" más comunes ocurren en personas infectadas con treponema pallidum, herpesvirus y en personas con lupus eritematoso sistémico y otras enfermedades reumáticas.
Prueba ELISA - resultados. ¿Pueden ser falsos negativos?
Los resultados falsos negativos pueden aparecer en una etapa temprana de la infección, luego la prueba debe repetirse después de aproximadamente 3-4 semanas. Se llama ventana serológica, que es el período inicial de infección en el que el cuerpo aún no ha "logrado" producir anticuerpos específicos.
Lo mismo se aplica a las personas con inmunodeficiencia que no producen suficientes anticuerpos.
Un gran problema, especialmente en infecciones muy intensas, es la aparición de las llamadas inmunocomplejos que consisten en antígenos de Borrelia y anticuerpos específicos para ellos.
Como resultado, los anticuerpos se vuelven "invisibles" para los métodos de uso común, como ELISA, y aunque están presentes en el material analizado, no pueden detectarse.
En tales casos, el laboratorio puede utilizar la descomposición de complejos inmunes. Este tratamiento está diseñado para liberar los anticuerpos. Sin embargo, este método no se usa ampliamente debido a la falta de estandarización en los laboratorios.
Vale la pena saberlo¿Por qué el diagnóstico de la enfermedad de Lyme no es fácil?
Esto se debe a la complejidad de la respuesta inmune contra Borrelia y las limitaciones de los métodos de laboratorio. La diversidad de variedades y la aparición de nuevas que causan infecciones, especialmente en el continente europeo, no facilitan el desarrollo de métodos de diagnóstico eficaces.
Recientemente han aparecido más variedades en Europa, como Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana y Borrelia spielmanii. Además, en el cuerpo, las espiroquetas de Borrelia pueden convertirse en quistes o permanecer en lugares del cuerpo inaccesibles para las células del sistema inmunológico.
Siendo así "invisible" para el sistema inmunológico. Además, se ha demostrado que los tejidos pueden contener fragmentos de bacterias que tienen propiedades fuertemente proinflamatorias. Se cree que son responsables de los síntomas crónicos de la enfermedad de Lyme, a pesar de los resultados negativos de las pruebas de laboratorio.
Literatura
1. Witecka-Knysz E. et al. Enfermedad de Lyme: ¿por qué es tan difícil el diagnóstico? Diagnóstico de laboratorio de abril de 2007.
2. Moore A. et al., Directrices actuales, problemas clínicos comunes y direcciones futuras para el diagnóstico de laboratorio de la enfermedad de Lyme, Estados Unidos. Emerg Infect Dis. Julio de 2016; 22 (7).
3. Diagnóstico de laboratorio de enfermedades transmitidas por garrapatas. Recomendaciones del Grupo de Trabajo: Cámara Nacional de Diagnósticos de Laboratorio, Instituto Nacional de Salud Pública-Instituto Nacional de Higiene, Consultor Nacional en el campo de enfermedades infecciosas, Departamento de Enfermedades Infecciosas y Neuroinfecciones, Universidad Médica de Białystok, Sociedad Polaca de Virología, Varsovia 2014
4. Hosseini S. et al.: Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) de la A a la Z. Springer 2017.
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